AAT 研发的新型钙离子荧光探针 点亮你的科研之路

简介

Calbryte™520，Calbryte™590和Calbryte™630提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载穿过细胞膜的Calbryte^TM520 AM，Calbryte^TM590 AM或Calbryte^TM630 AM。一旦进入细胞内，Cal520®AM，Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte™染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表达细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte™520，Calbryte™590或Calbryte™630的荧光。高灵敏度和>100倍荧光增强的特性使Calbryte™520 AM，Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte™520，Calbryte™590和Calbryte™630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。此外，Calbryte™590和Calbryte™630的Ex/Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。此外，Calbryte™520，Calbryte™590或Calbryte™630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。Calbryte™520可在488nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。Calbryte™590经过优化，可在555nm激发，并与TRITC/Cy3滤光片组配合使用。Calbryte™630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。光谱和钙结合特性总结如下（参见表1）。

表1.Calbryte™520，Calbryte™590或Calbryte™630

试剂的光谱和Ca²⁺结合特性

使用Calbryte™520 AM ,Calbryte™590 AM 或Calbryte™630 AM酯类

1.使用Calbryte™520，Calbryte™590或Calbryte™630 AM酯类称重传感器：

Calbryte™AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。在这些条件下，AM酯应稳定三个月。

以下是我们推荐的将Calbryte™520 AM，Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM酯加入活细胞的方案。 该说明仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte^TM520AM，Calbryte^TM590 AM或Calbryte^TM 630 AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte^TM520 AM，Calbryte^TM590 AM或Calbryte^TM630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte™520 AM，Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127解决方案可从AAT Bioquest获取。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse™丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从AAT Bioquest获取。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的染料。

g）对于Calbryte^TM520 AM，在Ex/Em=490/525nm处进行钙测试，对于Calbryte^TM590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte^TM630 AM，使用610/640nm进行钙测试。